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                                                1. 今天是2019年10月23日 星期三,歡迎光臨本站 上海唯地生物技術有限公司 網址: www.rwus.icu

                                                  農桿菌感受態_化轉

                                                  EHA105

                                                  文字:[大][中][小] 2015-8-27    瀏覽次數:5963    
                                                   EHA105 Chemically Competent Cell 產品說明書





                                                  產品規格 (CAT#: AC1010)

                                                  EHA105:                                                                  100μl/支
                                                  pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
                                                  保存條件(保質期):                                         -80℃(12個月)


                                                  基因型

                                                  C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine



                                                  產品說明
                                                  EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產的EHA105化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

                                                   

                                                  操作方法

                                                  1. -80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入 冰中。

                                                  2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量),用手撥打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

                                                  3. 加入700 μl無抗生素的LBYEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3小時。

                                                  4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3

                                                  (當平板只含有50 μg/ml kan 時,28培養48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 時,需28培養60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28培養72-90 h)。

                                                   

                                                  備注

                                                  1、農桿菌相關抗生素配方:

                                                  抗生素

                                                  配方

                                                  原液

                                                  工作液

                                                  羧芐青霉素(carb

                                                  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

                                                  50 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  硫酸卡那霉素(kan

                                                  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

                                                  50 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  鏈霉素(strep

                                                  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

                                                  10 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  利福平(rif

                                                  DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

                                                  10 mg/ml

                                                  20 μg/ml

                                                  慶大霉素(gent

                                                  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

                                                  20 mg/ml

                                                  40 μg/ml

                                                   

                                                  2、常用農桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

                                                  農桿菌菌株

                                                  羧芐青霉素(carb)

                                                  鏈霉素(strep)

                                                  利福平(rif)

                                                  慶大霉素(gent)

                                                  硫酸卡那霉素(kan)

                                                  AGL-1

                                                  R

                                                  S

                                                  R

                                                  S

                                                  S

                                                  EHA101

                                                  S

                                                  S

                                                  R

                                                  S

                                                  R

                                                  EHA105

                                                  S

                                                  S

                                                  R

                                                  S

                                                  S

                                                  LBA4404

                                                  S

                                                  R

                                                  R

                                                  S

                                                  S

                                                  GV3101

                                                  S

                                                  S

                                                  R

                                                  R

                                                  S

                                                   

                                                  3LBYEB配方:

                                                  component

                                                  LB(液體)/L

                                                  LB(固體)/L

                                                  component

                                                  YEB(液體)/L

                                                  YEB(固體)/L

                                                  Tryptone

                                                  10 g

                                                  10 g

                                                  Tryptone

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Yeast extract

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Yeast extract

                                                  1 g

                                                  1 g

                                                  NaCl

                                                  10 g

                                                  10 g

                                                  牛肉浸膏

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  NaOH 

                                                  調PH7.0

                                                  調PH7.0

                                                  蔗糖

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Agar

                                                  15 g

                                                  MgSO4*7H2O

                                                  0.49 g

                                                  0.49 g

                                                   

                                                   

                                                   

                                                  NaOH 

                                                  調PH7.0

                                                  調PH7.0

                                                   

                                                   

                                                   

                                                  Agar

                                                  15 g


                                                  注意事項

                                                  1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

                                                  2. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

                                                  3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量。

                                                  4. 利福平濃度不應高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2

                                                  5. 培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失,但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)


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                                                  天津十一选五14期开奖结果

                                                  <em id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></em>
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                                                3. <em id="0ahg4"></em><em id="0ahg4"></em><dd id="0ahg4"></dd>

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                                                                                                <em id="0ahg4"><ol id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></ol></em>

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                                                                                                          <button id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></button>
                                                                                                        2. <dd id="0ahg4"><tr id="0ahg4"></tr></dd>
                                                                                                        3. <button id="0ahg4"></button>
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                                                                                                                          1. <div id="0ahg4"></div>

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                                                                                                                                            1. 微信夺宝二维码大全 大众麻将游戏免费下载 足球比分90vs足球 万喜堂娱乐 mg娱乐游戏检测 高博电子娱乐 重庆时时历史开彩结果 好运来时时彩平app 棋牌游戏赚钱 万喜堂代理 重庆时时总和大小计划 必赢客计划 11选五怎么打稳赚 如何藏分出款 三个骰子猜大小技巧 扑克赌博三公技巧大全