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                                                1. 今天是2019年5月26日 星期日,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

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                                                  文字:[大][中][小] 2018-8-13    浏览?#38382;?b class="red">618    

                                                  JM108 Chemically Competent Cell 产品说明书 




                                                  产品规格(CAT#: DL1022)

                                                  JM108:                                                     100μl/支

                                                  pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

                                                  保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 


                                                  基因型


                                                  F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+) 


                                                  产品说明

                                                  JM108来源于JM106菌株,最初是作为黏粒?#30446;?#30340;宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA 的稳定性。JM108菌株最大的特点是扩繁质粒产量大,纯度高,且质?#35838;?#23450;,特别是超螺旋质粒比例?#32454;擼?#36229;螺旋质粒所占比例一般>90%(gyrA96突变型说明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突变,导致拓扑异构酶Ⅱ的功能受影响,增加了超螺旋质粒的比例),非常适合后续的动物细胞转染实验(超螺旋质粒?#21830;?#39640;细胞转染的效率)。此外该菌株具有萘啶酸抗性。唯地生物开发的JM108感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>0.5×109 cfu/μg DNA。


                                                  操作方法

                                                  1. JM108感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底混匀,冰中静置25分钟。

                                                  2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

                                                  3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm?#27492;?0分钟。

                                                  4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的培养基上。

                                                  5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少13小时。


                                                  注意事项

                                                  1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

                                                  2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。




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