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                                                1. 今天是2019年5月23日 星期四,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

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                                                  文字:[大][中][小] 2018-1-31    浏览?#38382;?b class="red">1704    

                                                  EPI300 Chemically Competent Cell 产品说明书 




                                                  产品规格 (CAT#: DL1084)

                                                  EPI300:                                                         100μl/支

                                                  pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl

                                                  保存条件(保质期):                         -80℃(6个月)


                                                  基因型

                                                  F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr.


                                                  产品说明

                                                  EPI300细胞含有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒?#27597;?#25335;贝扩?#20445;?#35825;?#25216;立?#21487;以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长?#20445;?/span>trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒?#30446;?#36125;数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱?#25216;立瘢?/span>ori V复制子质粒?#30446;?#36125;数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒?#30446;?#36125;数,特别适合于各?#26893;?#31283;定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳动物基因组DNA)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μg DNA。




                                                  操作方法

                                                  1. EPI300感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底混匀,冰中静置25分钟。

                                                  2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

                                                  3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

                                                  4. 5000 rpm离心一分钟?#31449;?#30041;取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

                                                      LB培养基上。

                                                  5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。




                                                  注意事项

                                                     感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。







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                                                  EPI300 Chemically Competent Cell 产品说明书

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