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                                                1. 今天是2019年5月24日 星期五,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

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                                                  文字:[大][中][小] 2017-10-30    浏览?#38382;?b class="red">2167    

                                                   DH5α λpir Chemically Competent Cell 产品说明书 





                                                  产品规格(CAT#: DL1002)

                                                  DH5α λpir:                                              100μl/支

                                                  pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

                                                  保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 


                                                  基因型

                                                  F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA



                                                  产品说明

                                                  DH5α λpir菌株来源于DH5?#31890;?#22312;DH5α大肠?#21496;?#22522;因组中引入LAMpir,?#27425;狣H5α λpir,该菌株可以表达 PIR蛋白,使得含有R6Kg ori复制子的质粒可以在其中正常复制。 DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA 的稳定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选;但DH5α λpir菌株生长速度?#19979;?#22312;平板培养或液体摇菌时应延长生长时间。唯地生物开发的DH5α λpir感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。



                                                  操作方法

                                                  1. DH5α λpir感受态细胞从-80℃拿出,?#26438;?#25554;入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底混匀,冰中静置25分钟。

                                                  2. 42℃水浴热激45秒,?#26438;?#25918;回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

                                                  3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏70分钟。

                                                  4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

                                                  5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少18小时。


                                                   

                                                  注意事项

                                                  1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

                                                  2. DH5α λpir菌株生长缓慢,在平板上培养或液体摇菌时应延长菌体生长时间(37℃,18小时以上)。

                                                  3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。





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                                                  DH5α λpir Chemically Competent Cell 产品说明书

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