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                                                1. 今天是2019年5月23日 星期四,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

                                                  新品推荐

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                                                  文字:[大][中][小] 2016-6-27    浏览?#38382;?b class="red">1566    

                                                  EPI400 Electroporation-Competent Cell 产品说明书




                                                  产品规格(CAT#: DE1085)

                                                  EPI400 Electroporation-Competent Cell                50μl/支

                                                  pUC19 (control vector,10pg/μl):                                10μl

                                                  保存条件(保质期):                                         -80℃(6个月)


                                                  基因型

                                                  F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

                                                   

                                                  产品说明

                                                  EPI400电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。该菌株来源于EC100菌株,将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因,即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低质粒?#30446;?#36125;数,特别适合于各?#26893;?#31283;定DNA或毒性基因的克隆,在加入WDEPI-诱?#25216;?I 后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选,tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力,rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400电击感受态细胞适用于不稳定DNA或毒性基因的克隆,经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1010 cfu/μg DNA。


                                                  操作方法

                                                  1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于?#21024;?#30340;吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发?#21024;?#31435;即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降?#38534;?/span>

                                                  2. -80℃保存的EPI400电击感受态细胞插入冰中分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用?#26893;?#25171;EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

                                                  A. 测定转化效?#36866;?#29992;1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19;

                                                  B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA浓度不超过100ng/μl,体积不超过5μl/50μl 感受态。

                                                  3. 200 μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

                                                  4. 启动电转仪,设置?#38382;?span lang="EN-US">C=25 μF,PC=200 ΩV=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐?#38382;?#20063;可?#27492;?#29992;电转仪推荐的?#38382;?#25805;作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

                                                  5. 2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基(室温),用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管(BD Falcon50ml锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C. 培养基至5ml37℃,225 rpm?#27492;?span lang="EN-US">60分钟。

                                                  6. 5000rpm离心一分钟?#31449;?#37325;悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌?#25335;?#22823;,若全部涂板请选用?#26412;?5cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。


                                                  S.O.C 培养基配方

                                                  2% Tryptone

                                                  0.5% Yeast Extract

                                                  10 mM NaCl

                                                  2.5 mM KCl

                                                  10 mM MgCl2

                                                  10 mM MgSO4

                                                  20 mM glucose

                                                  PH-7.0

                                                  S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).

                                                   

                                                  注意事项

                                                  1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10

                                                  2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

                                                  3. DNA不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染?#20445;?#36716;化效率?#26412;?#19979;降。

                                                  4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

                                                  5. 若转化大质粒或想获得?#32454;?#36716;化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

                                                  6. 对于连接产物转化,最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物,保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

                                                  7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通200ul枪头应剪去枪头尖0.6cm) 避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。

                                                  8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。





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                                                  天津十一选五14期开奖结果

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                                                                                                  1. <em id="0ahg4"></em>
                                                                                                  2. <dd id="0ahg4"></dd>
                                                                                                        1. <div id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></div><sup id="0ahg4"><label id="0ahg4"></label></sup>

                                                                                                          <div id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></div>

                                                                                                          <button id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></button>
                                                                                                        2. <dd id="0ahg4"><tr id="0ahg4"></tr></dd>
                                                                                                        3. <button id="0ahg4"></button>
                                                                                                              1. <div id="0ahg4"></div>

                                                                                                                <div id="0ahg4"></div>

                                                                                                                <div id="0ahg4"><tr id="0ahg4"></tr></div>

                                                                                                                          1. <div id="0ahg4"></div>

                                                                                                                                  1. <em id="0ahg4"></em>
                                                                                                                                  2. <em id="0ahg4"><tr id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></tr></em>

                                                                                                                                            1. 湖北快三统计湖北快三走势图 一定牛河北快三 凤凰论坛两码中特 天津时时对刷 幸运飞艇计划软件人工 飞艇开奖结果历史 2019精准平特一肖资料 上海快三专家杀号 360老时时 香港赛马会投注网 pk拾是国家彩票吗 qq麻将原理 2019076双色球开奖结果 赛车现场开奖直播 湖北30选5开奖走势图 江苏时时结果