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                                                1. 今天是2019年5月23日 星期四,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

                                                  新品推荐

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                                                  文字:[大][中][小] 2018-1-2    浏览?#38382;?b class="red">894    

                                                  R5421 Chemically Competent Cell 产品说明书



                                                   

                                                  产品规格 (CAT#: YC1080)

                                                  R5421 Competent Cell:                                       100μl/支              保存: -80℃(3个月)

                                                  pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)                           10μl              保存:-80℃(12个月)

                                                  Carrier DNA (5 μg/μl)                                              100μl              保存:-20℃(12个月)

                                                  PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12个月)


                                                  基因型

                                                  MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64


                                                  产品说明

                                                  R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株,在文献中也称为CY162,MATα型,多用于K+/钾离子转?#35828;?#30333;的鉴定试验中,也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为:ura3leu2,该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中国正常生长,在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢,当培养基中KCl浓度低于0.5mM,R5421(CY162)细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

                                                   

                                                  操作方法

                                                  1. Carrier DNA 在每?#38382;褂们?#35201;通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。

                                                  2. 取100 μl冰上融化的R5421感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 μg,Carrier DNA10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

                                                  3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

                                                  4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。

                                                  5. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。



                                                  注意事项


                                                  1. 感受态细胞最好在冰上融化。

                                                  2. 转化高浓度的质粒?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量。

                                                  3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

                                                  4. R5421酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

                                                  5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,?#27426;?#26377;些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

                                                  6. 酵母在缺陷培养基中生长速?#32570;萗PDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见?#26412;? mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见?#26412;? mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见?#26412;? mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见?#26412;? mm克隆。



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                                                  R5421 Chemically Competent Cell 产品说明书

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                                                                                                                                  2. <em id="0ahg4"><tr id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></tr></em>

                                                                                                                                            1. 时时如何杀跨度 爱彩乐助手 北京时时开奖视频直播 澳洲幸运5走势图网址 重庆时时诈骗最新案 生肖特马走势 靠谱的淘宝返利公众号有哪些 pk10投注十大平台 多乐彩走势图彩乐乐 新疆时时三星跨度 49码开奖公式规律 辽宁福彩快乐十二技巧 赛车八码平刷 河南22选5开奖直播 pk10快乐赛计划 快三计划群有托的吗