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                                                1. 今天是2019年5月14日 星期二,欢迎光临本站 上海唯地生物技术有限公司 网址: www.rwus.icu

                                                  农?#21496;?#24863;受态_化转

                                                  GV3101(pSoup-p19)

                                                  文字:[大][中][小] 2017-7-3    浏览?#38382;?b class="red">3449    

                                                  GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell 产品说明书





                                                  产品规格 (CAT#: AC1003)

                                                  GV3101(pSoup-p19):                                             100μl/支
                                                  pGs2(control vector,10ng/μl )                                    10μl
                                                  保存条件(保质期):                                         -80℃(12个月) 


                                                  基因型


                                                  C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)



                                                  产品说明

                                                  p19白来源于番茄丛矮病毒,可抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应,提高异源基因转录本的稳定性,进而促进异源蛋白的表达,广泛应用于转基因植物及烟草叶片,拟南芥叶片,番茄叶片或原生质体的瞬时表达系统中。GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,?#21496;?#26666;携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性;在GV3101菌株中转入help质粒:pSoup-p19?#27425;狦V3101(pSoup-p19)菌株,可帮助pGreen,62SK,pGs2等质粒在农?#21496;?#20013;复制,同时赋予该菌株四环素(tet)抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司生产的GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。


                                                  操作方法

                                                  1. 取-80℃保存的农?#21496;?#24863;受态于室温或?#20013;?#29255;刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

                                                  2. 每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率?#32454;擼?#31532;一?#38382;褂们白詈米?#39044;实验确定所加质粒的量),用?#26893;?#25171;管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

                                                  3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

                                                  4. 6000 rpm离心一分钟?#31449;?#30041;取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50 μg/ml kan ?#20445;?/u>28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif ?#20445;?#38656;28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。


                                                   

                                                  注意事项

                                                  1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率?#26412;?#19979;降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

                                                  2. 转化高浓度的质粒?#19978;?#24212;减少最终用于涂板的菌量,本公司生产的GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞具有四环素抗性,但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆?#20445;?#21482;需加入目标质粒抗性?#30446;?#29983;素,不加四环素。

                                                  3. 平板上阳性克隆密度过大?#20445;?#30001;于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。

                                                  4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农?#21496;?#29983;长,会降?#25512;?#29983;长速度和转化效率。

                                                  5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农?#21496;?#26681;据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农?#21496;?#30340;转基因操作,培养农?#21496;?#26102;不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失?#27597;?#29575;极低 (可以忽略)。


                                                  备注

                                                  1、农?#21496;?#30456;关抗生素配方:

                                                  抗生素

                                                  配方

                                                  原液

                                                  工作液

                                                  羧?#26143;?#38665;素(carb

                                                  双蒸水溶解,0.22 μm?#22235;?#36807;?#39034;?#33740;

                                                  50 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  硫酸卡那霉素(kan

                                                  双蒸水溶解,0.22 μm?#22235;?#36807;?#39034;?#33740;

                                                  50 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  链霉素(strep

                                                  双蒸水溶解,0.22 μm?#22235;?#36807;?#39034;?#33740;

                                                  10 mg/ml

                                                  50 μg/ml

                                                  利福平(rif

                                                  DMSO溶解,0.22 μm?#22235;?#36807;?#39034;?#33740;

                                                  10 mg/ml

                                                  20 μg/ml

                                                  庆大霉素(gent

                                                  双蒸水溶解,0.22 μm?#22235;?#36807;?#39034;?#33740;

                                                  20 mg/ml

                                                  40 μg/ml

                                                   

                                                  2、常用农?#21496;?#25239;性?#28023;?/strong>R:抗;S?#22909;?#24863;。)

                                                  农?#21496;?#33740;株

                                                  羧?#26143;?#38665;素(carb)

                                                  链霉素(strep)

                                                  利福平(rif)

                                                  庆大霉素(gent)

                                                  硫酸卡那霉素(kan)

                                                  AGL-1

                                                  R

                                                  S

                                                  R

                                                  S

                                                  S

                                                  EHA101

                                                  S

                                                  S

                                                  R

                                                  S

                                                  R

                                                  EHA105

                                                  S

                                                  S

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                                                  S

                                                  LBA4404

                                                  S

                                                  R

                                                  R

                                                  S

                                                  S

                                                  GV3101

                                                  S

                                                  S

                                                  R

                                                  R

                                                  S


                                                  3LBYEB配方:

                                                  component

                                                  LB(液体)/L

                                                  LB(固体)/L

                                                  component

                                                  YEB(液体)/L

                                                  YEB(固体)/L

                                                  Tryptone

                                                  10 g

                                                  10 g

                                                  Tryptone

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Yeast extract

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Yeast extract

                                                  1 g

                                                  1 g

                                                  NaCl

                                                  10 g

                                                  10 g

                                                  牛肉浸膏

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  NaOH 

                                                  PH7.0

                                                  PH7.0

                                                  蔗糖

                                                  5 g

                                                  5 g

                                                  Agar

                                                  15 g

                                                  MgSO4*7H2O

                                                  0.49 g

                                                  0.49 g

                                                   

                                                   

                                                   

                                                  NaOH 

                                                  PH7.0

                                                  PH7.0

                                                   

                                                   

                                                   

                                                  Agar

                                                  15 g

                                                   




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                                                  <em id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></em>
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                                                3. <em id="0ahg4"></em><em id="0ahg4"></em><dd id="0ahg4"></dd>

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                                                                  <div id="0ahg4"><tr id="0ahg4"></tr></div>

                                                                            1. <div id="0ahg4"></div>

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                                                                                    2. <em id="0ahg4"><tr id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></tr></em>

                                                                                              1. <em id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></em>
                                                                                              2. <dd id="0ahg4"></dd><div id="0ahg4"></div><dd id="0ahg4"></dd><div id="0ahg4"></div>

                                                                                                
                                                                                                
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                                                                                                <em id="0ahg4"><ol id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></ol></em>

                                                                                                1. <div id="0ahg4"></div>
                                                                                                  1. <em id="0ahg4"></em>
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                                                                                                        1. <div id="0ahg4"><ol id="0ahg4"></ol></div><sup id="0ahg4"><label id="0ahg4"></label></sup>

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                                                                                                        3. <button id="0ahg4"></button>
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                                                                                                                <div id="0ahg4"><tr id="0ahg4"></tr></div>

                                                                                                                          1. <div id="0ahg4"></div>

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                                                                                                                                  2. <em id="0ahg4"><tr id="0ahg4"><mark id="0ahg4"></mark></tr></em>

                                                                                                                                            1. 福彩3d投注图 排列三8码组六遗漏 可以开房间的炸金花游戏 3d打印一次多少钱 打龙虎300快怎么赢2000 分分快3和值算法 下载斗地主最新版 时时彩后二组选包胆 八人牛牛名牌抢庄技巧 亿宏国际彩票注册会不会被骗 重庆时时开彩结果360 北京pk拾开奖直播 惠泽社群独家六肖 炸金花可提现1元1金币 鼎盛国际娱乐手机版 球探网足球即时此分